Wie messen Sie die Fluoreszenzpolarisation?

Die Fluoreszenzpolarisation (FP) ist eine leistungsstarke Technik, die in verschiedenen Bereichen verwendet wird, einschließlich Biochemie, Pharmakologie und Umweltwissenschaft. Als führender Lieferant von Fluoreszenzdetektor verstehen wir, wie wichtig genaue und zuverlässige FP -Messungen sind. In diesem Blog -Beitrag werden wir untersuchen, wie die Fluoreszenzpolarisation von den Grundprinzipien bis hin zu den praktischen Überlegungen misst.

Grundprinzipien der Fluoreszenzpolarisation

Die Fluoreszenzpolarisation basiert auf der Tatsache, dass das emittierte Licht auch polarisiert ist, wenn ein fluoreszierendes Molekül durch polarisiertes Licht angeregt wird. Der Polarisationsgrad des emittierten Lichts hängt von der Rotationsbewegung des fluoreszierenden Moleküls während der Fluoreszenzlebensdauer ab. Wenn das Molekül groß oder an ein Makromolekül gebunden ist, ist seine Rotationsbewegung eingeschränkt und das emittierte Licht bleibt hoch polarisiert. Wenn das Molekül in Lösung klein und frei ist, ist seine Rotationsbewegung schnell und das emittierte Licht wird depolarisiert.

Die Polarisation der Fluoreszenz wird durch den Polarisationswert (P) quantifiziert, der als die Differenz zwischen den Intensitäten der vertikalen und horizontal polarisierten Komponenten des emittierten Lichts geteilt durch ihre Summe definiert wird:

[P = \ frac {i _ {\ parallel} -i _ {\ perp}} {i _ {\ parallel}+i _ {\ perp}}]

wobei (i _ {\ parallel}) die Intensität des vertikal polarisierten emittierten Lichts ist und (i _ {\ prakt}) die Intensität des horizontal polarisierten emittierten Lichts.

Instrumentierung zur Messung der Fluoreszenzpolarisation

Um die Fluoreszenzpolarisation zu messen, benötigen Sie einen Fluoreszenzdetektor, der mit Polarisationsoptik ausgestattet ist. Unser Unternehmen bietet eine Reihe von hochwertigen Fluoreszenzdetektoren, einschließlich derIsothermischer Fluoreszenzdetektorund dieDigitaler isothermischer Fluoreszenzdetektor, die speziell für genaue und empfindliche FP -Messungen ausgelegt sind.

Diese Detektoren bestehen typischerweise aus den folgenden Komponenten:

1. Lichtquelle: Eine Lichtquelle wie eine Xenonlampe oder ein Laser wird verwendet, um das Anregungslicht zu erzeugen. Das Licht sollte polarisiert werden, bevor es die Probe erreicht.
2. Polarisatoren: Polarisatoren werden verwendet, um die Polarisation des Anregung und des Emissionslichts zu kontrollieren. Der Anregungspolarisator befindet sich im Pfad des Anregungslichts, um sicherzustellen, dass er linear polarisiert ist. Der Emissionspolarisator wird vor dem Detektor platziert, um die vertikalen und horizontal polarisierten Komponenten des emittierten Lichts zu messen.
3. Probenhalter: Ein Probenhalter wird verwendet, um die Probe im Pfad des Anregungslichts zu halten. Es sollte so ausgelegt sein, dass es Lichtstreuung und Hintergrundfluoreszenz minimiert.
4. Detektor: Ein Fotodetektor wie ein Photomultiplikatorrohr (PMT) oder ein Ladung - gekoppeltes Gerät (CCD) wird verwendet, um die Intensität des emittierten Lichts zu messen. Der Detektor sollte in der Lage sein, die Intensitäten der vertikalen und horizontal polarisierten Komponenten getrennt zu messen.

Versuchsaufbau für Fluoreszenzpolarisationsmessungen

Die folgenden Schritte sind an der Einrichtung eines Experiments zur Messung der Fluoreszenzpolarisation beteiligt:

1. Wählen Sie die entsprechende Fluoreszenzsonde aus: Wählen Sie eine Fluoreszenzsonde, die für Ihre Anwendung geeignet ist. Die Sonde sollte eine hohe Quantenausbeute und eine lange Fluoreszenzlebensdauer haben.
2. Bereiten Sie die Probe vor: Bereiten Sie die Probe vor, indem Sie die Fluoreszenzsonde in einem geeigneten Puffer auflösen. Wenn Sie eine Bindungswechselwirkung untersuchen, fügen Sie den Liganden oder das Makromolekül in der angemessenen Konzentration zur Probe hinzu.
3. Kalibrieren Sie das Instrument: Kalibrieren Sie den Fluoreszenzdetektor gemäß den Anweisungen des Herstellers. Dies kann die Einstellung der Verstärkung des Detektors, die Festlegung der Anregungs- und Emissionswellenlängen und die Messung der Hintergrundfluoreszenz beinhalten.
4. Messen Sie die Polarisationswerte: Legen Sie die Probe in den Probenhalter und messen Sie die Intensitäten der vertikalen und horizontal polarisierten Komponenten des emittierten Lichts. Berechnen Sie den Polarisationswert mit der oben genannten Formel.

Faktoren, die Fluoreszenzpolarisationsmessungen beeinflussen

Mehrere Faktoren können die Genauigkeit und Zuverlässigkeit von Fluoreszenzpolarisationsmessungen beeinflussen:

1. Temperatur: Die Rotationsbewegung des fluoreszierenden Moleküls ist temperaturabhängig. Eine Temperaturanstieg führt zu einer Erhöhung der Rotationsbewegung und einer Abnahme des Polarisationswerts. Daher ist es wichtig, während der Messung eine konstante Temperatur aufrechtzuerhalten.
2. Viskosität des Lösungsmittels: Die Viskosität des Lösungsmittels beeinflusst die Rotationsbewegung des fluoreszierenden Moleküls. Ein viskoser Lösungsmittel schränkt die Rotationsbewegung ein und erhöht den Polarisationswert.
3. Konzentration der Fluoreszenzsonde: Die Konzentration der Fluoreszenzsonde kann den Polarisationswert beeinflussen. Bei hohen Konzentrationen können Selbstlöschungen und Aggregation der Sonde auftreten, was zu ungenauen Messungen führt.
4. Photobleaching: Photobleichung ist die irreversible Zerstörung des fluoreszierenden Moleküls durch das Anregungslicht. Es kann zu einer Abnahme der Fluoreszenzintensität führen und die Polarisationsmessung beeinflussen. Verwenden Sie zum Minimieren von Photobleichungen ein Anregungslicht mit niedriger Intensität und kurze Belichtungszeiten.

Anwendungen der Fluoreszenzpolarisation

Die Fluoreszenzpolarisation hat in verschiedenen Bereichen einen weiten Anwendungsbereich:

1. Drogenentdeckung: FP wird verwendet, um die Bindungswechselwirkungen zwischen Arzneimitteln und ihren Zielen zu untersuchen. Durch Messung des Polarisationswerts können Sie die Bindungsaffinität und die Dissoziationskonstante des Arzneimittelzielkomplexes bestimmen.
2. Immunoassays: FP - Basierte Immunoassays werden verwendet, um das Vorhandensein von Antigenen oder Antikörpern in biologischen Proben nachzuweisen. Die Bindung des Antigens an den Antikörper -markierten Fluoreszenzsonden führt zu einer Änderung des Polarisationswerts, der zur Quantifizierung des Analyten verwendet werden kann.
3. Nukleinsäureanalyse: FP kann verwendet werden, um die Hybridisierung von Nukleinsäuren zu untersuchen. Die Bindung eines fluoreszenzmarkierten Oligonukleotids an seine komplementäre Sequenz führt zu einer Änderung des Polarisationswerts, der zum Nachweis und zur Quantifizierung der Zielnukleinsäure verwendet werden kann.

Fehlerbehebung Fluoreszenzpolarisationsmessungen

Wenn Sie Probleme während der Fluoreszenzpolarisationsmessungen stoßen, können die folgenden Tipps zur Fehlerbehebung hilfreich sein:

1. Niedrige Polarisationswerte: Wenn die Polarisationswerte niedriger sind als erwartet, prüfen Sie auf Faktoren wie hohe Temperatur, niedrige Viskosität des Lösungsmittels oder hohe Konzentration der Fluoreszenzsonde.
2. Hohe Hintergrundfluoreszenz: Eine hohe Hintergrundfluoreszenz kann durch Verunreinigungen in der Probe oder im Lösungsmittel oder durch Lichtstreuung verursacht werden. Reinigen Sie die Probe und verwenden Sie ein sauberes Lösungsmittel. Stellen Sie sicher, dass der Probenhalter sauber und frei von Kratzern ist.
3. Inkonsistente Messungen: Inkonsistente Messungen können auf Photobleaching, schlechte Ausrichtung der Polarisatoren oder Schwankungen in der Lichtquelle zurückzuführen sein. Minimieren Sie die Photobleichung, überprüfen Sie die Ausrichtung der Polarisatoren und stellen Sie sicher, dass die Lichtquelle stabil ist.

Abschluss

Die Messung der Fluoreszenzpolarisation ist eine wertvolle Technik zur Untersuchung der Bindungswechselwirkungen und der molekularen Dynamik von fluoreszierenden Molekülen. Als Lieferant von Fluoreszenzdetektor sind wir bestrebt, eine hohe Qualitätsinstrumentierung und technische Unterstützung bereitzustellen, damit Sie genaue und zuverlässige FP -Messungen durchführen können. Unabhängig davonIsothermischer FluoreszenzdetektorUndDigitaler isothermischer Fluoreszenzdetektorkann Ihre Bedürfnisse erfüllen.

Wenn Sie daran interessiert sind, unsere Fluoreszenzdetektoren zu kaufen oder Fragen zu Messungen der Fluoreszenzpolarisation zu haben, kontaktieren Sie uns bitte für eine detaillierte Konsultation und Beschaffungsverhandlung. Unser Expertenteam ist bereit, Sie bei der Auswahl des am besten geeigneten Instruments für Ihre Bewerbung zu unterstützen.

Referenzen

1. Lakowicz, JR (2006). Prinzipien der Fluoreszenzspektroskopie. Springer Science & Business Media.
2. Szollosi, J. & Damjanovich, S. (2004). Fluoreszenzpolarisation: Ein praktischer Leitfaden. In Stromprotokollen in der Zytometrie (S. 1 - 17). John Wiley & Sons, Inc.