Staphylococcus haemolyticus ist ein grampositives Koagulase-negatives Bakterium, das in Krankenhäusern sehr häufig ist. In den letzten Jahren haben in den Krankenhau erworbene Infektionen aufgrund ihres höheren Risikos zunehmend Beachtung erhalten. Staphylococcus haemolyticus kann weiterhin Hautinfektionen, Meningitis, Peritonitis und sogar Sepsis verursachen. Verzögerungen bei der klinischen Diagnose können zu einem Verschlechterung des Gesundheitszustands führen. Daher ist eine schnelle Diagnose von S. haemolyticus von entscheidender Bedeutung für eine genaue Behandlung.
Das Forschungsteam des Lehrers Ji Tuo von der Zentrallaborabteilung des zweiten Volkskrankenhauses von Lianyungang, China, veröffentlichte einen Artikel "Ein schneller und visueller Nachweis von Staphylococcus haemolyticus in klinischen Proben mit miRA-LFs" in der Zeitschrift "Analytica Chimica Acta" mit einem Wirkungsfaktor von 6,2.
1. Überblick überforschen
In dieser Studie wurde eine miRA-LFS-Methode, die auf dem MVAA-Gen basiert, festgestellt, um Staphylococcus haemolyticus nachzuweisen. Die multizymsototherme schnelle Nukleinsäureamplifikationstechnologie miRA wurde mit LFS mit lateralem Durchflusstest-Streifen kombiniert, um einen schnellen Erregerdetektion zu erzielen.
Das Experiment wurde nach 37 Grad durchgeführt und die Ergebnisse konnten innerhalb von 9 Minuten festgestellt werden. Die Erkennungsempfindlichkeit war 0. 147CFU/Reaktion.
Die miRA-LFS-Nachweismethode eignet sich zum Nachweis von Staphylococcus hämolyticus in klinischen Proben und realisiert die POCT-Methode zur Identifizierung von Staphylococcus hämolyticus, was für eine schnelle Diagnose und Behandlung in Bereichen von großem Wert von großem Wert ist.
Das Forschungsteam verwendete MIRA-LFS, QPCR und traditionelle Bakterienkulturmethoden, um 95 zufällige klinische Proben zu analysieren, und bestätigte die klinische Anwendbarkeit.
2. Forschungsmethoden
Das schematische Diagramm der miRA-LFS-Erkennung ist oben gezeigt.
Die Forschung verwendete das DNA-isotherme Schnellverstärkungskit von AMP-Future-Biotech (kolloidaler Gold-Teststreifenstreifen) und Nukleinsäuretektionsteststreifen.
Die MVAA -Gen -Primer -Länge ist 30-35 Nukleotide und die Amplifikationsproduktlänge 100-350 bp. Insgesamt 6 Paare von Kandidatenprimern wurden entworfen. Die miRA -Analyse wurde unter Verwendung von GDNA von Standard -Staphylococcus -Hämolyticus -Stämmen durchgeführt, Kandidatenprimer wurden untersucht und Amplifikationsprodukte wurden unter Verwendung von 2% Agarosegelelektrophorese gezeigt.
Entwerfen Sie dann die Sonde basierend auf der Vorwärtsprimersequenz (16 bp rückwärts). Das 5' -Ende der Sonde wurde mit FITC gekennzeichnet und das 3' -Ende wurde mit C3 -Blockierung gekennzeichnet. Verwenden Sie THF, um das 31 Nucleotid in der Sonde zu ersetzen. THF ist 30 bp vom 5 'Ende und 15 bp vom 3' Ende. Das 5' -Ende des ausgewählten Reverse Primers ist mit Biotin markiert.
Darüber hinaus optimierte das Forschungsteam die Reaktionsbedingungen für den miRA-LFS-Nachweis von Staphylococcus hämolyticus. In Intervallen von 2 Minuten von 4 bis 12 Minuten bei 37 Grad testen. Die Ergebnisse werden zur Reaktionszeit von 8 Minuten angezeigt und die Testlinie ist deutlich sichtbar. Zusätzlich werden Tests in Intervallen von 5 Grad ab 22-52 Grad durchgeführt. 37-42 Grad ist die am besten geeignete Temperatur für die miRA-LFS-Erkennung. Daher beträgt die optimale Reaktionszeit und Temperatur des miRA-LFS-Verfahrens für Staphylococcus haemolyticus 8 min bzw. 37 Grad. Zusammen mit dem Endergebnis, das innerhalb von 1 Minute durch LFS sichtbar ist, beträgt die Gesamterkennungszeit 9 Minuten.
3. Experimentelle Ergebnisse
Empfindlichkeitsüberprüfung
Der miRA-LFS-Assay wurde an verschiedenen Konzentrationen von genomischer DNA (gDNA) durchgeführt, die aus seriell verdünnten Staphylococcus haemolyticus-Kulturen (1 0^6-10^0 cfu/ml) erhalten wurden.
Die probabilistische Regressionsanalyse zeigte, dass der durch den miRA-LFS-Assay bestimmte 95% LOD 0. 147 CFU/Reaktion war.
Spezifitätsüberprüfung
Durch die Analyse von 18 häufigen pathogenen mikrobiellen Stämmen und 15 klinischen Staphylococcus haemolyticus-Stämmen wurde die Selektivität des miRA-LFS-Nachweiss von Staphylococcus haemolyticus bestimmt. Die Ergebnisse zeigten, dass der miRA-LFS-Test für 18 andere pathogene Bakterien negativ war und für 15 verifizierte klinische Proben von Staphylococcus haemolyticus positiv war.
Der MIRA-LFS-Nachweis ist hochselektiv und zum Screening von Staphylococcus hämolytisch geeignet.
Tatsächliche Probentests
Das Lianyungang Second People's Hospital sammelte zufällig 95 Proben, darunter 35 Haut- und Weichteilproben, 16 Urinproben, 14 Sputumproben und 30 Blutproben.
Die Ergebnisse zeigten, dass die Nachweismethode zu 100% mit der QPCR -Methode übereinstimmte. Zusätzlich waren die Empfindlichkeit und Spezifität der miRA-LFS-Nachweismethode zur Identifizierung von Staphylococcus hämolyticus-Infektionen 100% bzw. 98,73%. Diese Ergebnisse verifizierten die technische Machbarkeit dieser Methode bei der Nachweis von Staphylococcus hämolytisch in klinischen Proben weiter.
Die miRA-LFS-Methode wird zum schnellen POCT-Nachweis von Staphylococcus hämolyticus verwendet. Es ist effizient, genau, einfach und kostengünstig und hilft, schnelle Diagnose- und Behandlungsentscheidungen zu treffen.
Erfahren Sie mehr über die Mira -Technologie
Die multi-enzym-isotherme Nukleinsäure-Amplifikationstechnologie von AMP-Future verstärkt Nukleinsäuren bei einer konstanten Temperatur von 39 Grad -42 Grad mit einer Reaktionszeit von nur 5-20 Minuten. Darüber hinaus sind keine strengen Laborbedingungen erforderlich, und die Anwendungsszenarien sind diversifiziert: Allgemeine Krankenhauslaborabteilungen, Grundversorgung, Hausuntersuchungen, Felder usw.
Reagenzproduktformen sind vielfältig: gefriergetrocknetes Pulver, gefriergetrocknete Mikrokugeln usw.; Die Anzeigeergebnisse sind vielfältig: Gelelektrophorese, Fluoreszenzkurve, kolloidale Gold -Teststreifen usw. Das Reagenz hat eine stabile Leistung, ist einfach zu bedienen und ist für die Aufbewahrung und den Transport bequem.
Mit MIRA als Kernplattformtechnologie hat es eine Reihe von unterstützenden Produkten wie "Ultraschnelle Nukleinsäure-Freisetzungstechnologie", "Dual-Channel-isotherme Fluoreszenzdetektor", "Integriertes vollautomatisches geschlossenes Detektionssystem", "Selbsttesting-Nucleis-Säure-Detektion-Geräte", etc. erzeugen eine Gesamtlösung für Vergewaltigungsmolekulardetektionen entwickelt.